無(wú)菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范 (含《潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》)
無(wú)菌室規(guī)范化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范 (含《潔凈室沉降菌測(cè)驗(yàn)規(guī)范操作規(guī)程》)
1.意圖 本規(guī)程旨在為無(wú)菌操作及無(wú)菌室的維護(hù)供應(yīng)一個(gè)規(guī)范化規(guī)程。
2.適用規(guī)模 生測(cè)驗(yàn)驗(yàn)室
3.責(zé)任者 QC主管生測(cè)員
4.界說(shuō) 無(wú)
5.**留意事項(xiàng) 嚴(yán)厲無(wú)菌操作，避免微生物污染；操作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。
6.規(guī)程
6.1.無(wú)菌室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間和緩沖間，無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)到達(dá)10000級(jí)，室內(nèi)溫度堅(jiān)持在20-24℃，濕度堅(jiān)持在45-60%。超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)到達(dá)100級(jí)。
6.2.無(wú)菌室應(yīng)堅(jiān)持清潔，禁止堆積雜物，以防污染。
6.3.謹(jǐn)防悉數(shù)**器件和培育基污染，已污染者應(yīng)停止運(yùn)用。
6.4.無(wú)菌室應(yīng)備有作業(yè)濃度的**液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液，等等。
6.5.無(wú)菌室應(yīng)定時(shí)用適合的**液**清潔，以保證無(wú)菌室的潔凈度契合需求。
6.6.需求帶入無(wú)菌室運(yùn)用的儀器，器械，平皿等悉數(shù)物品，均應(yīng)包扎緊密，并應(yīng)經(jīng)過(guò)適合的辦法**。
6.7.作業(yè)人員進(jìn)入無(wú)菌室前，有必要用番筧或**液洗手**，然后在緩沖間替換專用作業(yè)服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦洗雙手)，方可進(jìn)入無(wú)菌室進(jìn)行操作。
6.8.無(wú)菌室運(yùn)用前有必要翻開無(wú)菌室的紫外燈輻照**30分鐘以上，并且一起翻開超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無(wú)菌室，再用紫外燈輻照**20分鐘。
6.9.供試品在查看前，應(yīng)堅(jiān)持外包裝完整，不得敞開，以防污染。查看前，用70％的酒精棉球**外外表。
6.10.每次操作過(guò)程中，均應(yīng)做陰性對(duì)照，以查看無(wú)菌操作的可靠性。
6 .11.汲取菌液時(shí)，有必要用吸耳球汲取，切勿直接用口接觸吸管。
6.12.接種針每次運(yùn)用前后，有必要經(jīng)過(guò)火焰灼燒**，待冷卻后，方可接種培育物。
6.13.帶有菌液的吸管，試管，培育皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來(lái)蘇爾溶液的**桶內(nèi)**，24小時(shí)后取出沖刷。
6.14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3％的來(lái)蘇爾傾覆在被污染處*少30分鐘，再做處理。作業(yè)衣帽等遭到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽**后洗刷。
6.15.凡帶有活菌的物品，有必要經(jīng)**后，才能在水龍頭下沖刷，禁止污染下水道。
6.16.無(wú)菌室應(yīng)每月查看菌落數(shù)。在超凈作業(yè)臺(tái)敞開的狀況下，取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培育皿若干，無(wú)菌操作別離寫入消融并冷卻至約45℃的養(yǎng)分瓊脂培育基約15ml，放至凝結(jié)后，倒置于30～35℃培育箱培育48小時(shí)，證實(shí)無(wú)菌后，取平板3～5個(gè)，別離放置作業(yè)位置的左中右等處，開蓋露出30分鐘后，倒置于30～35℃培育箱培育48小時(shí)，取出查看。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)均勻不得超越1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室均勻不得超越3個(gè)菌落。如超越極限，應(yīng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行完全**，直至重復(fù)查看契合需求為止。
7.參照
參照《藥品清潔查驗(yàn)辦法》 《中國(guó)藥品查驗(yàn)規(guī)范操作規(guī)范》中 (無(wú)菌查看法)章節(jié) 中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)規(guī)范 YY/T0188.6-1995《藥品查驗(yàn)操作規(guī)程》
8.分發(fā)部分
質(zhì)量管理部 無(wú)菌室技能指導(dǎo)說(shuō)明 在獲得了無(wú)菌環(huán)境和無(wú)菌資料后，咱們還要堅(jiān)持無(wú)菌狀況，才能對(duì)某種特定的已知微生物進(jìn)行研討或運(yùn)用它們的功用，不然外界的各種微生物很簡(jiǎn)略混入。外界不相干的微生物混入的表象，在微生物學(xué)中咱們叫做污染雜菌。避免污染是微生物學(xué)作業(yè)中非常要害的技能。一方面是完全**，另一方面避免污染，是無(wú)菌技能的兩個(gè)方面。別的，咱們還要避免所研討的微生物，特別是致病微生物或經(jīng)過(guò)基因工程改造了的正本自然界不存在的微生物從咱們的實(shí)驗(yàn)容器中逃逸到外界環(huán)境中去。為了這些意圖，在微生物學(xué)中，有很多辦法。
無(wú)菌室內(nèi)的地面、墻面有必要平整，不易藏污納垢，便于清潔。作業(yè)臺(tái)的臺(tái)面應(yīng)當(dāng)處于水平狀況。無(wú)菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無(wú)菌室的紫外線燈距離作業(yè)臺(tái)面 1 米。作業(yè)人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)穿滅過(guò)菌的服裝，戴帽子。
當(dāng)時(shí)無(wú)菌室多存在于微生物工廠，通常實(shí)驗(yàn)室則運(yùn)用超凈臺(tái)。超凈臺(tái)其主要功用是運(yùn)用空氣層流設(shè)備掃除作業(yè)臺(tái)面上部包含微生物在內(nèi)的各種細(xì)小塵土。經(jīng)過(guò)電動(dòng)設(shè)備使空氣經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾用具后進(jìn)入作業(yè)臺(tái)面，使臺(tái)面一直堅(jiān)持在活動(dòng)無(wú)菌空氣操控之下。并且在挨近外部的一方有一道高速活動(dòng)的氣簾避免外部帶菌空氣進(jìn)入。
在條件較艱難的當(dāng)?shù)?，也能夠用木制無(wú)菌箱替代超凈臺(tái)。無(wú)菌箱構(gòu)造簡(jiǎn)略，便于移動(dòng)，箱正面開有兩個(gè)洞，不操作時(shí)用推拉式小門擋住，操作時(shí)能夠?qū)㈦p臂伸進(jìn)去。正面上部裝有玻璃，便于在內(nèi)部操作，箱內(nèi)部裝有紫外線燈，從側(cè)面小門能夠放進(jìn)去用具和菌種等。 運(yùn)用 無(wú)菌操作技能當(dāng)時(shí)不僅在微生物學(xué)研討和運(yùn)用上起著無(wú)足輕重的效果，并且在很多生物技能中也被廣泛運(yùn)用。例如轉(zhuǎn)基因技能、單克隆抗體技能等。
《潔凈室沉降菌測(cè)驗(yàn)規(guī)范操作規(guī)程》
1意圖：樹立潔凈室中沉降菌的測(cè)驗(yàn)規(guī)范操作規(guī)程，保證藥品在規(guī)矩潔凈等級(jí)內(nèi)進(jìn)行出產(chǎn)。
2規(guī)模：潔凈室的沉降菌的監(jiān)測(cè)。
3根據(jù)：國(guó)家規(guī)范GB/T 16294-1996。
4責(zé)任：QA潔凈度監(jiān)測(cè)人員、微生物查驗(yàn)人員對(duì)本準(zhǔn)則的施行擔(dān)任。
5內(nèi)容
5.1潔凈室：對(duì)塵粒及微生物污染規(guī)矩需進(jìn)行環(huán)境操控的房間或區(qū)域。
5.2潔凈作業(yè)臺(tái)：一種作業(yè)臺(tái)或許與之類似的一個(gè)關(guān)閉圍擋作業(yè)區(qū)。其特點(diǎn)是自身能夠供應(yīng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾的空氣或氣體，如筆直層流潔凈罩、水平層流罩、筆直層流潔凈作業(yè)臺(tái)、水平層流潔凈作業(yè)臺(tái)、自凈器等。
5.3潔凈度：潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的答應(yīng)統(tǒng)計(jì)數(shù)。
5.4菌落：**培育后，由一個(gè)或幾個(gè)**繁衍而構(gòu)成的一**集落，簡(jiǎn)稱CFU。通常用個(gè)數(shù)表明。
5.5測(cè)驗(yàn)辦法
5.5.1辦法概述：本測(cè)驗(yàn)辦法運(yùn)用沉降法，即經(jīng)過(guò)自然沉降原理搜集在空氣中的生物粒子于培育基平皿，經(jīng)48小時(shí)以上培育，在適合的條件下讓其繁衍到可見的菌落數(shù)，來(lái)鑒定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)鑒定潔凈室的潔凈度。
5.5.2所用的儀器和設(shè)備
5.5.2.1高壓**鍋：運(yùn)用時(shí)參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進(jìn)行操作。
5.5.2.2恒溫培育箱：有必要定時(shí)對(duì)培育箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。
5.5.2.3培育皿：通常選用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培育皿。運(yùn)用前將培育皿置于121℃濕熱**20分鐘。
5.5.2.4培育基：通常養(yǎng)分瓊脂培育基。將培育基加熱熔化，冷卻至約45℃在無(wú)菌操作條 件下將培育基寫入培育皿，每皿約15m1。待瓊脂培育基凝結(jié)后，將培育基平皿放入30～35℃恒溫培育箱中培育數(shù)小時(shí)，若培育基平皿上確無(wú)菌落成長(zhǎng)，即可供采樣用，制備好的培育基平皿應(yīng)在2～8℃的環(huán)境中寄存。
5.5.3測(cè)驗(yàn)過(guò)程
5.5.3.1采樣辦法：將已制備好的培育皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，翻開培育皿蓋，使培育基外表露出0.5小時(shí)，再將培育皿蓋上蓋后倒置。
5.5.3.2培育：悉數(shù)采樣完畢，將培育皿倒置于恒溫培育箱中培育。在30～35℃培育，時(shí)刻不少于48小時(shí)。每批培育基應(yīng)有對(duì)照實(shí)驗(yàn)，查看培育基自身是不是污染，可每批選定3只培育皿作對(duì)照培育。
5.5.3.3菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5～10倍放大鏡查看，有否遺失。若培育皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落堆疊，可分辯時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。
5.6留意事項(xiàng) 4.6.1測(cè)驗(yàn)用具要做**處理，以保證測(cè)驗(yàn)的可靠性、正確性。
5.6.2采納悉數(shù)辦法避免人為對(duì)樣本的污染。
5.6.3對(duì)培育基、培育條件及其他參數(shù)作具體的記錄。
5.6.4因?yàn)?*品種繁復(fù)，不同甚大，計(jì)數(shù)時(shí)通常用透射光于培育皿反面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培育皿邊際成長(zhǎng)的菌落，并須留意**菌落與培育基沉淀物的差異，必要時(shí)用顯微鏡辨別。
5.6.5采樣前應(yīng)仔細(xì)查看每個(gè)培育皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)除掉。
5.7測(cè)驗(yàn)規(guī)矩 5.7.1測(cè)驗(yàn)狀況
5.7.1.1沉降菌測(cè)驗(yàn)前：被測(cè)驗(yàn)潔凈室（區(qū)）的溫濕度須到達(dá)規(guī)矩的需求，靜壓差、有必要操控在規(guī)矩值內(nèi)。被測(cè)驗(yàn)潔凈室（區(qū)）已**。
5.7.1.2測(cè)驗(yàn)狀況有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報(bào)告中注明測(cè)驗(yàn)狀況。
5.7.1.3測(cè)驗(yàn)人員：測(cè)驗(yàn)人員有必要穿戴契合環(huán)境潔凈度等級(jí)的作業(yè)服。靜態(tài)測(cè)驗(yàn)時(shí)，室內(nèi)測(cè)驗(yàn)人員不得多于2自己。
5.7.2測(cè)驗(yàn)時(shí)刻
5.7.2.1對(duì)單向流，如100級(jí)凈化房間內(nèi)及層流作業(yè)臺(tái)，測(cè)驗(yàn)應(yīng)在凈化空調(diào)體系正常